DNS試劑(GB 20287)參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB 20287-2006

DNS試劑(GB 20287)參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB 20287-2006

植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀,常以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基,具有還原性,屬于還原糖;多糖和蔗糖等屬于非還原糖?？梢岳枚嗵悄鼙凰崴鉃閱翁堑奶匦酝ㄟ^測定水解后的單糖含量對總糖進(jìn)行測定。

檢測原理是用羧甲基纖維素鈉鹽(CMC)為底物，經(jīng)纖維素酶水解后生成還原糖，后者能與反應(yīng)，其中硝基還原成氨基，使溶液變?yōu)槌壬?，橙色的深度與還原糖的濃度成正比。因此可用比色法求得還原糖的含量，進(jìn)而求出纖維素酶活的大小。

稱取3，5-二硝基水楊酸3.15 g(化學(xué)純)，加水500 mL。，攪拌5 s，水浴至45 ℃。然后逐步加入100 mL 0.2g/ mL的氫氧化鈉溶液，同時(shí)不斷攪拌。直到溶液清澈透明(注意：在加入氫氧化鈉過程中，溶液溫度不要超過48℃)。再逐步加入四水酒石酸鉀鈉91.0 g、苯2.50 g和無水亞硫酸鈉2.50 g。繼續(xù)45 ℃水浴加熱，同時(shí)補(bǔ)加水300 mL，不斷攪拌，直到加入的物質(zhì)*溶解。停止加熱，冷卻至室溫后，用水定容至1000 mL。用燒結(jié)玻璃過濾器過濾。取濾液，儲(chǔ)存在棕色瓶中，避光保存。室溫下存放7 d后可以使用，有效期為12個(gè)月。

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 取9支大試管，分別按表一順序加入各種試劑。 表一 將上述各管溶液混后，在紫外可見分光光度計(jì)上用綠色濾光片(520nm) 進(jìn)行比色測定，用空白管溶液調(diào)零，記錄光密度值。以光密度值為橫坐標(biāo)，以葡萄糖濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

DNS試劑用途：

1.在生化試驗(yàn)中，DNS常用于還原糖含量的測定。

2.也可用于生物質(zhì)中半纖維素含量的測定。它們均要與標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖曲線進(jìn)行比對。