中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)采用原理

中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)采用原理

簡介：

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)是一類于哺乳動物組織內(nèi)廣泛分布的磷酸酯酶，其活性在pH 9.2~9.8范圍內(nèi)最佳。它主要存在于附睪上皮之靜纖毛、腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、肝的毛細膽管膜、微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮等物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜)，還可以出現(xiàn)在高爾基復合體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、腸上皮之溶酶體、吞飲小泡、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。

中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP) 采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法)，而不是采用金屬沉淀法來顯示其堿性磷酸酶的活性，它作用原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內(nèi)堿性磷酸酶可以通過水解AB-BI磷酸鹽，從而釋放出萘酚與磷酸，前者與偶聯(lián)重氮鹽可以生成有色產(chǎn)物，定位于細胞質(zhì)中。該染液專門用于骨髓細胞或血液涂片的中性粒細胞的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位位于胞槳，呈藍色，結(jié)果比金屬鹽沉淀法更可靠。

儲存條件：

6個月有效。

自備材料：

1、 載玻片

2、 多聚甲醛（4%）

3、 顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

(一)、涂片

1、通過NAP固定液固定，制備新鮮血液或骨髓細胞涂片，充分水洗。

2、滴加準備好的NAP孵育液，孵育及水洗。

3、滴加甲基綠染色液或核固紅染色液復染。水洗、晾干后鏡檢。

(二) 貼壁培養(yǎng)細胞

1、準備其他容器或6孔板培養(yǎng)的細胞，棄液，使用PBS清洗干凈。

2、使用NAP固定液或多聚甲醛進行固定，PBS清洗。

3、滴加配制好的NAP孵育液，置于濕盒內(nèi)，避光孵育，PBS清洗。

4、加入甲基綠染色液或核固紅染色液復染。使用PBS清洗后鏡檢。