土壤堿性磷酸酶

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測定意義：                          

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷化合物礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響。通常按照其適pH范圍，分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。

測定原理：

堿性環(huán)境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水、無水乙醇和甲苯。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體×1瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1152μL無水乙醇（自備），48 μL蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1瓶，2 μmol/mL苯酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

催化反應(yīng)：

稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入0.05mL甲苯（自備），輕搖15min；加0.4 mL試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計時，催化反應(yīng)24h；到時后迅速加入1mL試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。10000rpm室溫離心10min，取上清液置于冰上待測。

顯色反應(yīng)：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸餾水，100 μL試劑三，20 μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μL，混勻后室溫靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)液，100 μL試劑三，20 μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μL，混勻后室溫靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL試劑三，20 μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μL，混勻后室溫靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

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