介紹實驗室緩沖液配置

介紹實驗室緩沖液配置

在食品檢驗理化實驗室里各種各樣的緩沖液都需要自行配置，在我們?nèi)粘５臏?zhǔn)備過程中都需要對緩沖液進行準(zhǔn)備，緩沖液對我們?nèi)粘５那疤幚碛泻艽蟮挠绊?，緩沖液配置也是食品檢驗中一種很重要的過程，以下是食品檢驗資格證培訓(xùn)小編總結(jié)的常用緩沖液配置方法，以供各位學(xué)員自行學(xué)習(xí)和配置。

苯酚/氯-仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法：1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚/氯-仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯-仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯-仿/異戊醇(24 : 1)混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

組份濃度：1 M Tris-HCl    配制量：1 L

配制方法：1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。

Solution II(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：200mM NaOH，1%(W/V)SDS　配制量：500ml

配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中，10% SDS 50ml，2N NaOH 50ml2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻3.室溫保存，此溶液保存時間zui-好不要超過一個月，注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌

Solution III(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH　配制量：500 ml

配制方法：1. 稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。KOAc 147g、CH3COOH57.5ml2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。4. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

0.5 M EDTA(pH8.0)

組份濃度：0.5 M EDTA　　配制量：1 L

配制方法：稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20 g NaOH)。注意：pH值至8.0時，EDTA才能*溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1 L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。

3 M 醋酸鈉(pH5.2)

組份濃度：3M 醋酸鈉，配制量：100ml

配制方法：1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保存。

PBS Buffer

組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4，配制量：1 L

配制方法：1. 稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO41.42g、KH2PO40.27g2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA        配制量：1 L

配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。1M Tris-HCl Buffer(PH7.4，7.6，8.0)100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。3. 將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。4. 室溫保存。

2 N NaOH

組份濃度：2 N NaOH　配制量：100 ml

配制方法：1. 量取80 ml去離子水置于100～200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待NaOH*溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。

Solution I(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose，配制量：1 L

配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。1M Tris-HCl(PH8.0)25ml，0.5M EDTA(PH8.0)20ml，20%Glucose(1.11M)45ml，dH2O910ml2. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

2.5 N HCl

組份濃度：2.5 N HCl　配制量：100 ml

配制方法：1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸(11.6 N)，均勻混合。2. 室溫保存。

5 M NaCl

組份濃度：5 M NaCl　配制量：1 L

配制方法：　1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

20% (W/V) Glucose

組份濃度：20% (W/V) Glucose，配制量：100 ml

配制方法：1. 稱取20 g Glucose置于100～200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

10% (W/V) SDS

組份濃度：10% (W/V)SDS、配制量：100ml

配制方法：1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68℃加入溶解2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.23.將溶液定容至100ml后，室溫保存。

1 M DTT

組份濃度：1 M DTT　　配制量：20 ml

配制方法：1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。3. 適量分成小份后，-20℃保存。

10 mM ATP

組份濃度：10 mM ATP　配制量：20 ml

配制方法：1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20℃保存。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

組份濃度：1.5 M Tris-HCl，配制量：1 L

配制方法：1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。

10 M 醋酸銨

組份濃度：10 M 醋酸銨、配制量：100 ml

配制方法：1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100～200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。4. 密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。