新型快速酵母轉(zhuǎn)化試劑盒新品現(xiàn)貨供應(yīng)

新型快速酵母轉(zhuǎn)化試劑盒新品現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品介紹：

酵母菌落快速轉(zhuǎn)化試劑盒是以未經(jīng)凍存的釀酒酵母平板菌落（無(wú)需搖菌）或者菌液作為菌體來(lái)源（短期4 ℃保存的平板或者菌液亦可使用），無(wú)需制備感受態(tài)細(xì)胞，無(wú)需分步熱激，一步轉(zhuǎn)化，整個(gè)操作流程在90 min內(nèi)完成。省去了通過(guò)兩次培養(yǎng)獲得狀態(tài)良好的菌體的過(guò)程，以及制備感受態(tài)的過(guò)程，節(jié)省了1-2天的菌種培養(yǎng)轉(zhuǎn)化時(shí)間，或者購(gòu)買(mǎi)感受態(tài)的經(jīng)費(fèi)。其轉(zhuǎn)化率可達(dá)經(jīng)典酵釀酒母轉(zhuǎn)化方法（SK2400）的50-80%（常規(guī)酵母雜交菌種檢測(cè)）。轉(zhuǎn)化效率可滿足除文庫(kù)傳化之外的其它轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。

菌落轉(zhuǎn)化步驟：

1.在無(wú)菌的1.5 mL的離心管中加入100 μL的P1溶液（轉(zhuǎn)化液）。

2.在上述轉(zhuǎn)化液中加入1 μg的質(zhì)粒DNA。共轉(zhuǎn)加入每種質(zhì)粒各1 μg。

3.挑取2-3個(gè)較大酵母菌落加入上述轉(zhuǎn)化液中，震蕩混勻。

4.置于42 ℃水浴60 min（每隔20 min 顛倒混勻一次，避免酵母菌沉底）。

5.可選步驟：3,000 rpm離心3 min，棄上清。用400 μL YPD Plus Liquid Medium（YT0004）重懸，30 ℃搖床震蕩培養(yǎng)30-60 min。YPD Plus用于轉(zhuǎn)化后復(fù)蘇酵母菌，轉(zhuǎn)化效率可以提高50-100。

6.3,000 rpm離心3 min。加入100 μL無(wú)菌水重懸菌體。

7.將重懸菌體全部涂布于相應(yīng)的缺陷型培養(yǎng)基平板上。

8.30 ℃恒溫培養(yǎng)3-5天，直至平板長(zhǎng)出菌落。

菌液轉(zhuǎn)化步驟：

收集1.5-3 mL酵母菌液沉淀后，加入100 μL P1溶液（轉(zhuǎn)化液）和1 μg質(zhì)粒DNA后震蕩混勻。后續(xù)步驟和平板菌落轉(zhuǎn)化步驟4-8相同。

注意事項(xiàng)：

1. 轉(zhuǎn)化全程要求無(wú)菌操作。

2. 為了保證轉(zhuǎn)化效率，感受態(tài)不宜直接用液氮凍存。

3. 增加酵母質(zhì)粒的純度和濃度可以提高轉(zhuǎn)化效率。