葡聚糖凝膠G-25操作方法

葡聚糖凝膠G-25操作方法

應(yīng)    用：利用分子篩作用，進行緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子;工業(yè)脫鹽。

性    狀：白色微球，多孔

凝膠類型：凝膠過濾填料，親水型凝膠

結(jié)構(gòu)成分：交聯(lián)右旋糖酐

粒    徑： 細顆粒20-80µm，中顆粒50-150µm，粗顆粒100-300µm

工作PH值：2-13

操作溫度：4-40℃

球蛋白分離范圍：1000-5000

保存條件：4-25℃

化學和物理性質(zhì):

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。 G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。 葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。 另外，粗級也可用于批量工藝。

化學穩(wěn)定性:

葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。 它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的，在強酸中凝膠骨架的糖昔鍵被水解。 接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應(yīng)避免使用。

物理穩(wěn)定性:

葡聚糖疑膠并不熔融，可以在濕態(tài)、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。 干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。 葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯(lián)度。

使用方法:

1. 葡聚糖凝膠預(yù)處理：

在室溫下，將葡聚糖凝膠干粉浸泡于蒸餾水中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，或者用蒸餾水煮沸至少1小時直至充分溶脹，凝膠體積不再變化。

注：在溶脹前，加入蒸餾水攪拌后使其自然沉降，沉降后若上層溶液中漂浮的凝膠碎片顆粒較多，需要重復(fù)多次漂洗將其除去，防止層析時阻塞凝膠柱，影響流速。

2. 裝柱：

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層; 裝柱要均勻，可在凝膠耐受的操作壓下裝柱，裝好的凝膠柱可以檢測柱效，檢測過濾柱裝填是否合格。

凝膠層析分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度：分級分離時，一般需要 100cm 左右長的層析柱，柱高與直徑之比為 20:1-100:1，柱高過高時，凝膠擠壓變形阻塞會引起較大的反壓，應(yīng)當盡可能避免；分組分離（例如脫鹽）時用短柱，柱高控制在40-50cm 以下，柱高與直徑的比約為 5:1-10:1。

3. 平衡：

上樣前用平衡液平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；

4. 上樣：

分級分離時上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積。

樣品溶液如有雜質(zhì)或沉淀應(yīng)過濾或離心除去，樣品的粘度不能過高，否則影響分離效果。

5. 洗脫方法:

可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；

6. 在位清洗(CIP)

凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。 方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

7. 保存

凝膠柱暫時不用，可將其回收，一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，可加入0.02%疊dan化鈉防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生長。