經(jīng)典酵母轉(zhuǎn)化試劑盒專用于：釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

經(jīng)典酵母轉(zhuǎn)化試劑盒專用于：釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

酵母轉(zhuǎn)化試劑盒主要用于釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，該試劑盒遵循廣大用戶的使用習(xí)慣，分別提供PEG、LiAc和Carrier DNA溶液，PEG、LiAc均經(jīng)過(guò)濾除菌，Carrier DNA經(jīng)特殊優(yōu)化處理，更有助于提高質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化效率。該試劑盒可根據(jù)實(shí)際需要靈活配制1 × LiAc溶液和轉(zhuǎn)化預(yù)混液，既方便使用，又經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。

感受態(tài)細(xì)胞制備：

1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養(yǎng)基平板上劃線，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

2.挑取酵母單菌落在YPDA培養(yǎng)基平板上劃3-5 mm，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

3.待酵母單菌落長(zhǎng)至直徑2 mm時(shí)，把酵母細(xì)胞接種到3 mL YPDA液體培養(yǎng)基中，30 ℃過(guò)夜培養(yǎng)。

4.第二天轉(zhuǎn)接到含有30-50 mL YPDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，待OD600達(dá)到0.4-0.5，3000 rpm離心5 min，棄上清。

5.沉淀用30-50 mL的無(wú)菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min，棄上清。

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無(wú)菌水）重懸后轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，3000 rpm離心5 min，棄上清。

注意：10 × LiAc Solution經(jīng)過(guò)pH緩沖，無(wú)需添加TE作為緩沖劑。

7.加入1 mL 1 × LiAc重懸，小體積轉(zhuǎn)化按照每管100 μL分裝，用于文庫(kù)轉(zhuǎn)化不分裝。

8.3000 rpm離心5 min，棄上清，感受態(tài)細(xì)胞即制備完畢。

注意：制備好的感受態(tài)好立即使用，在第8步離心前，室溫放置不應(yīng)超過(guò)5小時(shí)。

酵母轉(zhuǎn)化原理：

像釀酒酵母,線性化的轉(zhuǎn)化DNA和Pichiapastoris基因組的同源區(qū)域發(fā)生同源重組,使得線性化DNA產(chǎn)生穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子

這樣的整合方式顯示穩(wěn)定性,即使多拷貝轉(zhuǎn)化子在沒(méi)有選擇壓力的情況下也很穩(wěn)定.單交換事件（插入）比雙交換事件（置換）發(fā)生幾率更大.單插入事件中約發(fā)生1-10%概率的多插入事件.