多聚甲醛固定細(xì)胞的原理

 多聚甲醛固定細(xì)胞的原理

多聚甲醛固定細(xì)胞時(shí)，能使細(xì)胞內(nèi)的自由氨基基團(tuán)發(fā)生化學(xué)交聯(lián)，形成一網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，把細(xì)胞的各個(gè)結(jié)構(gòu)成分連接起來(lái)。但單獨(dú)用多聚甲醛固定細(xì)胞不能使抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此，標(biāo)本經(jīng)固定后必須用非離子去污劑透化標(biāo)本。商業(yè)甲醛溶液不能用于細(xì)胞染色固定，因?yàn)槠洳痪哂卸嗑奂兹┕潭?xì)胞的優(yōu)點(diǎn)，且細(xì)胞會(huì)被甲醇固定。

固定液可使細(xì)胞或組織的蛋白質(zhì)凝固，終止內(nèi)源性或外源性酶反應(yīng)，防止組織自溶或異溶，以保持原有結(jié)構(gòu)和形態(tài)。對(duì)免疫組化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或彌散。固定液種類很多，常見的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。其固定原理不同，各有優(yōu)缺點(diǎn)。目前在科學(xué)研究中多聚甲醛應(yīng)用最廣，通過(guò)形成分子間的交聯(lián)從而使細(xì)胞或組織的三維結(jié)構(gòu)得以被固定。多聚甲醛是甲醛的聚合物，性質(zhì)比甲醛穩(wěn)定，且對(duì)抗原的破壞能力弱于甲醛，因此，科學(xué)研究中常用多聚甲醛作為固定劑。

4%多聚甲醛固定液是一種廣泛用于免疫組化、免疫熒光(Immunofluorescence, IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式分析等檢測(cè)時(shí)組織、組織切片、細(xì)胞等生物樣品固定的溶液。本產(chǎn)品配制在PBS溶液中，可直接用于組織或細(xì)胞的固定，無(wú)需稀釋。若需使用低濃度多聚甲醛，可使用PBS按比例稀釋。

使用注意事項(xiàng)：

1、多聚甲醛放置過(guò)久其中的醛基可能會(huì)被氧化為酸，使溶液pH降低，從而影響染色。
2、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間。
3、多聚甲醛雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò)24小時(shí)。
4、多聚甲醛可長(zhǎng)期存在于固定過(guò)的細(xì)胞或組織樣品中，固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時(shí)仍會(huì)有殘留，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響，須盡量洗去殘留的多聚甲醛。
5、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
6、本產(chǎn)品對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

8、本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途。