NADP磷酸酶（NADPase）檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：NADP磷酸酶（NADPase）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

NADP磷酸酶(NADPase)檢測(cè)試劑盒

所需的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體30 mL×1瓶， 4℃保存。

試劑二：粉劑×6支，-20℃保存；用時(shí)加入1 mL試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑三：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水，溶解后4℃可保存一周。

試劑四：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水，溶解后4℃可保存一周。

試劑五：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑六：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑六20倍稀釋，即取 0.5mL試劑六加9.5蒸餾水，充分混勻1。

定磷試劑的配制：按H₂O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑

              應(yīng)為淺黃色，若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

樣本的前處理：

稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

操作步驟：

1、酶促反應(yīng)

37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）預(yù)熱5min

37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）準(zhǔn)確反應(yīng)20min后，沸水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，10000g常溫離心5min，取上清

2、定磷

混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴30min，冷卻至室溫，在 660nm處，蒸餾水調(diào)零，記錄各管吸光值

注意事項(xiàng)：

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格，要沒(méi)有一點(diǎn)磷，若試管放過(guò)磷酸或磷酸鹽緩沖液，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來(lái)水沖，后用蒸餾水沖干凈。用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。

2、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管和對(duì)照管只要做一次即可。

NADP磷酸酶(NADPase)檢測(cè)試劑盒