NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）檢測試劑盒

標(biāo)題：NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒

測定意義：

ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙酮酸和CO₂，以及伴隨NAD(P)⁺的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存。；

試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×2支，4℃保存；用時(shí)每支加1mL雙蒸水充分溶解備用；

試劑四：粉劑×2支，-20℃保存；用時(shí)每支加500μL雙蒸水充分溶解備用。

樣本的前處理：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備 ：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種），340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意事項(xiàng)：

1、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。

2、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃或25℃水浴放置。

3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒