異檸檬酸裂解酶（ICL）檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：異檸檬酸裂解酶（ICL）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理：

ICL催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD，NADH在340nm下有特征吸收峰，監(jiān)測(cè)340nm吸光度的減小速率可間接反應(yīng)ICL活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體×1支，4℃保存；

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入4mL雙蒸水，充分混勻待用。用不完的試劑-20℃保存；

樣本的前處理：

1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），15000g，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織處理：稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；15000g ，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測(cè)定

（1）工作液的配置，將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混合溶解，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min；

（2）在試劑四中加入4mL雙蒸水，充分溶解待用；

（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、150μL工作液和40μL試劑四，混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測(cè)試劑盒