HRP標記的兔抗牛IgM

描述：HRP標記的兔抗牛IgM
酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。

產(chǎn)品型號：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時間：2021-07-06
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產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題：HRP標記的兔抗牛IgM

產(chǎn)品概述

HRP標記的兔抗牛IgM

本產(chǎn)品僅用于研究用途，不用于人類、治療或診斷應用。

抗體來源	Rabbit
克隆類型	Polyclonal
交叉反應	cow
產(chǎn)品應用	WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
分子量	900kDa
性狀	Lyophilized or Liquid
濃度	2mg/1ml
免疫原	Full length plasma protein:
亞型	IgG
純化方法	affinity purified by Protein A
儲存液	0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件	Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

HRP標記的兔抗牛IgM

抗體可以通過不同的化學試劑交聯(lián)到酶（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶）、熒光染料（FITC、PE、APC等）、生物素（Biotin）、膠體金等。抗體標記HRP為經(jīng)典的方法為NaIO4氧化法，先將HRP糖基氧化成醛基，醛基與抗體的-NH2反應生成希夫氏堿反應，抗體分子與HRP分子形成穩(wěn)定結構。標記的時候一般按照抗體分子與HRP分子摩爾比1:4的比例進行標記，此時,兩者的質(zhì)量約為1:1。

1. 抗體/蛋白的HRP標記（NaIO4氧化法）
標記以2mg抗體為例。

1.1 抗體/蛋白的處理

待標記抗體/蛋白在50mM碳酸鹽緩沖液 (0.015M Na2CO3，0.035M NaHCO3，pH9.6) 中透析，其間換液2次，抗體/蛋白濃度調(diào)整為2mg/ml；或者將高濃度的抗體用0.5M碳酸鹽緩沖液(0.15M Na2CO3,0.35M NaHCO3 ,pH9.6)稀釋到2mg/ml，如果原抗體/蛋白溶液中含有Tris、NH4+等游離氨基的試劑，必須透析除去。

1.2 HRP酶的氧化

1.2.1 稱取2mg HRP干粉(Frdbio)溶于100 μL ddH2O 中。

1.2.2 稱取 NaIO4 21mg，溶于1 mL的ddH2O中，吸取100μL NaIO4溶液與100μL的HRP溶液緩慢混合，4℃下靜置 30min，此時溶液為綠色。

（注意：此后的操作均在避光條件下進行。）

1.2.3 吸?。?micro;L乙二醇緩慢加入氧化后的HRP溶液，室溫避光靜置 30min，此時溶液為褐色。

1.3 抗體的標記

1.3.1 將氧化好的HRP溶液直接加入到已處理好的抗體/蛋白溶液中，室溫反應２h。

1.3.2 稱取0.4mg的NaBH4，溶解于20µL的 ddH2O中，全部加入上步反應液中，4℃靜置 2h，每30min搖動一次。

1.3.3 PBS(pH7.2)透析過夜，標記液中加入體積比30%～50%的甘油，混勻后置于-20℃保存。

2. 抗體/蛋白的HRP標記（戊二醛法）

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