胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）檢測試劑盒

標題：胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）檢測試劑盒

產品概述

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒

測定原理：

利用ICDHc催化NADP⁺還原成NADPH反應，在340 nm下測定NADPH濃度的增加。

所需的儀器和用品:

紫外分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體50 mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2支，4℃保存；用時每支加275μL雙蒸水充分溶解備用；

試劑三：粉劑ⅹ2支，-20℃保存；用時每支加275μL雙蒸水充分溶解備用；

樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時開始計時，在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1；迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）水浴中，準確反應2分鐘；迅速取出比色皿并擦干，記錄2分20秒時的吸光度A2。計算ΔA=A2-A1。

注意事項：

1、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。

2、實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；試劑一37℃或25℃水浴放置。

3、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

4、兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒