己糖激酶（HK）檢測試劑盒

標(biāo)題：己糖激酶（HK）檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

己糖激酶(HK)檢測試劑盒

測定原理

HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體30mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：液體30mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體5 mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×1支，-20℃保存，臨用前加入4mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入2mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入250μL試劑一和250μL雙蒸水充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存；

樣本的前處理

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

   收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在340 nm波長下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘。迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，記錄5分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)前，將試劑一、二、三37℃或25℃預(yù)熱10分鐘，之后37℃或25℃室溫放置。試劑四、五、六和樣本在冰上放置，以免變性和失活。

2、如果一次性測定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三、四、五和六按比例配成混合液。

2、不同勻漿組織中HK活力不一樣，做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做1-2只預(yù)試，若A2-A1>1，則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液，使A2-A1<1，以提高檢測靈敏度。

3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

己糖激酶(HK)檢測試劑盒