堿性蛋白酶檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：堿性蛋白酶檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

堿性蛋白酶檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理：

在堿性條件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸生成鎢藍(lán)；鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰，測(cè)定680nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算AKP活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5mL蒸餾水溶解。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入5mL試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。

試劑四：粉劑×1瓶， 4℃保存。臨用前加20mL蒸餾水溶解。

試劑五：液體×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，0.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清液，即粗酶液。

測(cè)定：

1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到680 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.試劑二、試劑三和試劑四置于40℃水浴保溫30min以上。

3. 空白管：取0.5 mL EP管，加入20 μL粗酶液，40 μL試劑二，混勻后置于40℃水浴保溫10min；加入40μL試劑三，混勻后10000rpm 4℃離心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL試劑四，40μL試劑五，混勻后置于40℃水浴保溫20min，吸取200μL于680nm測(cè)定光吸收，記為A空白管。

4. 測(cè)定管：取0.5 mL EP管，加入20μL粗酶液，40μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min；加入40μL試劑二，混勻后10000rpm 4℃離心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL試劑四，40μL試劑五，混勻后置于40℃水浴保溫20min，吸取200μL于680nm測(cè)定光吸收，記為A測(cè)定管。（注意與空白管不同，先加試劑三，后加試劑二）

5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5 mL EP管，加入40μL標(biāo)準(zhǔn)品，200μL試劑四，40μL試劑五，混勻后置于40℃水浴保溫20min，吸取200μL于680nm測(cè)定光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

堿性蛋白酶檢測(cè)試劑盒